組換えスパイクタンパク質に基づくブタ急性下痢症候群コロナウイルスIgG抗体の間接的ELISA検出法の開発

豚急性下痢症候群コロナウイルス (SADS-CoV) は、新たに発見された豚の腸内病原性コロナウイルスであり、新生子豚に水様性下痢を引き起こし、養豚産業に重大な経済的損失を引き起こす可能性があります。現在、SADS-CoV感染とワクチンの有効性を評価する適切な血清学的方法がないため、この欠陥を補うために効果的な酵素免疫測定法（ELISA）を使用することが緊急に必要です。ここでは、ヒト IgG Fc ドメインと融合した SADS-CoV スパイク (S) タンパク質を発現する組換えプラスミドを構築して、組換えバキュロウイルスを生成し、HEK 293F 細胞で発現させました。S-Fc タンパク質はプロテイン G レジンで精製され、抗ヒト Fc および抗 SADS-CoV 抗体との反応性を保持しています。次に、S-Fcタンパク質を使用して間接ELISA(S-iELISA)を開発し、S-iELISAの反応条件を最適化しました。その結果、免疫蛍光アッセイ（IFA）およびウエスタンブロッティングで確認された40個のSADS-CoV陰性血清のOD450nm値を分析することにより、カットオフ値は0.3711であると決定されました。S-iELISA の実行中および実行間での 6 つの SADS-CoV 陽性血清の変動係数 (CV) は、すべて 10% 未満でした。交差反応性試験は、S-iELISA が他の豚ウイルス血清との交差反応性を持たないことを示しました。さらに、111 の臨床血清サンプルの検出に基づいて、IFA と S-iELISA の全体的な一致率は 97.3% でした。血清の7つの異なるOD450nm値を用いたウイルス中和試験では、S-iELISAによって検出されたOD450nm値がウイルス中和試験と正の相関があることが示されました。最後に、S-iELISA を 300 の養豚場血清サンプルで実施しました。他の豚エンテロウイルスの市販キットは、SADS-CoV、TGEV、PDCoV、および PEDV の IgG 陽性率がそれぞれ 81.7%、54%、および 65.3% であることを示しました。、それぞれ 6% です。結果は、S-iELISA が特異的、高感度、再現性があり、養豚業界で SADS-CoV 感染を検出するために使用できることを示しています。この記事は著作権によって保護されています。全著作権所有。